Cytokines - Questions Techniques Fréquemment Posées
Avant leur mise en vente, nos Cytokines et nos Produits Cytokines ont été minutieusement analysés afin de s’assurer qu’elles répondent aux critères de qualité ou d’activité suivants :
1. Authenticité: par l’analyse de la séquence N-terminale et si possible, par l’analyse en SDS-PAGE, RP-HPLC, et Mass Spectrometry versus standards
2. Pureté: par analyse SDS-PAGE et RP-HPLC
3. Activité Biologique : par des tests biologiques appropriés in vitro et in vivo
4. Structure Protéique: par spectroscopie UV, l’analyse en SDS-PAGE et si possible par l’analyse en HPLC avec la solution de contrôle
5. Contamination à l’endotoxine: par la méthode LAL cinétique
6. Contamination microbiologique : par la méthode de filtration des membranes; les solutions protéiques sont stérilisées par filtration avant d’être conditionnées
Les informations concernant chaque Cytokines figurent sur la fiche technique livrée avec le produit. Veuillez lire avec précaution ces informations afin d’obtenir les instructions nécessaires pour la reconstitution et le stockage du produit. Si après avoir pris connaissance des données techniques, vous avez besoin d’informations complémentaires, nous vous invitons à lire les questions–réponses suivantes ou vous pouvez contacter notre service technique au 01 47 59 50 83.
1. Que dois je savoir concernant la stabilité des réactifs protéiques ?
Outre les informations mentionnées sur les fiches techniques, tous nos produits sont formulés de manière à ce que les protéines lyophilisées soient parfaitement stables à température ambiante. Cependant, nous vous recommandons de stocker les produits lyophilisés à -20o C.
Pour reconstituer les solutions protéiques, nous vous recommandons de les stocker à court terme à une température de 4oC. Pour un stockage à long terme, ces solutions doivent d’abord être aliquotées (afin d’éviter plus d’un cycle de congélation / décongélation) et stockées ensuite à -20oC. Veuillez s’il vous plait prendre note que chaque cycle de congélation / décongélation peut causer la dénaturation de la protéine.
2. Pourquoi ne peut–on pas voir l’échantillon protéique dans le tube?
Contrairement à de nombreux produits disponibles sur le marché, les produits PeproTech sont formulés sans véhicule protéique (carrier) ou autres additifs (e.g., BSA, HSA, sucrose, etc.) et sont souvent lyophilisés avec une quantité minimale de sel. Par conséquent, la petite quantité de protéine peut être déposée dans le tube lors de la lyophilisation sous forme de film fin ou parfois même invisible. Avant l’ouverture, nous vous recommandons de centrifuger chaque tube dans une micro-centrifugeuse pendant 20-30 secondes afin de récupérer les protéines qui peuvent être logées sur la surface latérale du tube ou du bouchon. Nos procédures de contrôle de qualité certifient que chaque tube contient la quantité exacte de produit indiquée.
3. Quelle est la relation entre l’activité spécifique exprimée en ED50 et en unités/mg?
L’ ED50 correspond à la concentration de cytokines pour laquelle l’activité est de 50% de la réponse maximale. Cette méthode d’expression doit être utilisée seulement pour les cytokines qui présentent des courbes doses-réponses de forme sigmoïdale. La formule pour convertir l’activité exprimée en ED50 (ng/ml) en activité spécifique (unités/mg) est :
4. Quelles cytokines présentent des activités croisées entre les espèces ?
Mis à part quelques exceptions, la plupart des cytokines humaines sont actives sur les cellules de souris. De nombreuses cytokines de souris sont actives sur les cellules humaines, mais peuvent avoir une activité spécifique plus faible que les cytokines humaines correspondantes. Quelques cytokines humaines, tel que IL-7, présentent même une activité spécifique plus forte sur les cellules de souris que les cytokines de souris correspondantes. Les Interférons, GM-CSF, IL-3, et IL-4, connues pour être spécifiques aux espèces, ont très peu ou aucune activité sur les cellules non homologues. Par contre, les FGFs et Neurotrophines sont très conservés et présentent une excellente activité sur les cellules de différentes espèces animales.
